微生物菌种冻干机：液氮超低温保藏技术

微生物菌种真空冻干机是在抽真空的状态下让物质在低温下干燥的设备，主要用于微生物制剂和生物活性物质的干燥。菌种保藏室用来对微生物进行真空冻干保藏。微生物冷冻干燥法是长期保藏菌种的较好方法之一。因其便于批量生产、长期保藏成活力高，保藏和运输设备简单而成为一种普遍使用的保藏方法，已广泛应用于保存大部分细菌、真菌和一些病毒。液氮罐

1.安瓿管或冻存管的准备
   用圆底硼硅玻璃制品的安瓿管，或螺旋口的塑料冻存管。注意玻璃管不能有裂纹。将冻存管或安瓿管清洗干净， 121℃下高压灭菌15-20分钟，备用。

2.保护剂的准备
   保护剂种类要根据微生物类别选择。配制保护剂时，应注意其浓度，一般采用10-20%甘油。

3.微生物保藏物的准备
   微生物不同的生理状态对存活率有影响，一般使用静止期或成熟期培养物。分装时注意应在无菌条件下操作。

4.菌种的准备可采用下列几种方法：
   刮取培养物斜面上的孢子或菌体，与保护剂混匀后加入冻存管内；
接种液体培养基，振荡培养后取菌悬液与保护剂混合分装于冻存管内；
将培养物在平皿培养，形成菌落后，用无菌打孔器从平板上切取一些大小均匀的小块（直径约5-10毫米），真菌取菌落边缘的菌块，与保护剂混匀后加入冻存管内；
在小安瓿管中装1.2-2毫升的琼脂培养基，接种菌种，培养2-10天后，加入保护剂，待保藏。

5.预冻
   预冻时一般冷冻速度控制在以每分钟下降1℃为好、使样品冻结到-35℃。
目前常用的有三种控温方法：
—— 程序控温降温法，应用电子计算机程序控制降温装置，可以稳定连续降温，能很好地控制降温速率。
—— 分段降温法：将菌体在不同温级的冰箱或液氮罐口分段降温冷却，或悬挂于冰的气雾中逐渐降温。一般采用二步控温，将安瓿管或塑料小管，先放-20℃至-40℃冰箱中1-2小时，然后取出放入液氮罐中快速冷冻。这样冷冻速率大约每分钟下降1-1.5℃。
—— 对耐低温的微生物、可以直接放入气相或液相氮中。

6.保藏
   将安瓿管或塑料冻存管置于液氮罐中保藏。一般气相中温度为-150℃，液相中温度为-196℃。
保藏周期
一般10年以上。

7.复苏方法
   从液氮罐中取出安瓿管或塑料冻存管，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动。直到内部结冰全部溶解为止，一般约需50秒-100秒。开启安瓿管或塑料冻存管，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

8.适用范围
   各类微生物。
液氮保藏应注意事项
—— 防止冻伤，操作注意安全，带面罩及皮手套
—— 塑料冻存管一定要拧紧螺帽
—— 运送液氮时一定要用专用特制的容器，绝不可用密闭容器存放或运输液氮，切勿使用保温瓶存放液氮
—— 注意存放液氮容器的室内通风，防止过量氮气使人窒息
—— 防止安瓿管或塑料冻存管破裂爆炸，如液氮渗入管内，当从液氮容器取出时，液态氮体积膨胀约680倍，爆炸力很大，要特别小心 液氮罐
—— 注意观察液氮容器中液氮的残存量，定期补充液氮。