牛精液冷冻保存是将精液进行特殊处理,保存在超低温下,以达到长期保存的目的。通常采用液氮(-196℃)和干冰(-79℃)保存。
气相液氮罐
牛精液冷冻保存的优点:使用不受时间、地域以及种用雄性动物寿命的限制。可充分提高利用率。
低温保存细胞的原理,冷冻保护剂可以均匀充分地和细胞相接触,保护效果好。对组织而言,保护剂只能作用于其表面,对深层细胞无法起到保护作用。为了提高组织的存活率,应同时控制降温的速率。控制降温速率的慢速降温可以使细胞外溶液中的水结冰,导致细胞外溶液浓度升高,胞内水向膜外渗出,在达到一定温度时,将组织置于滦低温冰箱或液氮中冻存,可以减轻细胞内结晶对细胞的损伤,保持细胞的活性。
冷冻
在装有液氮的容器上置一铜纱网,距液氮面2厘米左右。将平衡后的精液用滴管按一定量滴于铜纱网,滴完最后一滴停3分钟~5分钟,当精液颗粒颜色变白时,立即浸入液氮,并将全部颗粒取下,收集于储精瓶或纱网布袋内,并做好标记,然后立即移入液氮罐中储存。
解冻
将预先配制好的9%柠檬酸的溶液1毫升,放入干净的小试管中,再置于40℃左右的温水杯中,迅速取颗粒冷冻精液1粒放入试管。轻轻摇动至化冻时,从水杯中取出试管,接着检查精液活力,即为合格品。
重视保精、快速解冻与镜检
1、根据液氮罐的性能要求,定期添加液氮,罐内盛装冻精的提筒不能露在液氮外面。
2、取精时,尽可能用长镊子,切勿将提筒或纱布袋提到临界线以上处(罐顶10厘米左右)。
气相液氮罐
3、从液氮中取出细管冻精时,要轻轻甩一两下,将塑料细管的棉塞端放入35℃~40℃的温水中,把封口端留在水外3厘米外,待管内精液融化一半时,立即取出备用。
4、解冻后的精液镜检时,精子的活力不低于标准方可用于输精,才能确保正常受精。
5、解冻后的精液应立即输配,不宜停放时间过长,应做到现解冻,现输精。