低温冷冻保存不会降低胚胎发育潜能,是保存女性生育力安全有效的方法。不同的胚胎冻融方法对胚胎完整率也有影响,玻璃化冷冻胚胎复苏后胚胎卵裂球完整性更好,具有更高的发育潜能。
进行配子或胚胎保存的目的是希望经过冷冻和复苏后,配子或胚胎仍能保持其生物学活性。胚胎或配子在-196℃的液氮中10年也不会退化,但由于来自环境中的大量辐射,也可能导致DAN损伤。冷冻保护剂的毒性作用、渗透性休克、细胞内冰晶形成等各种危险因素对细胞正常新陈代谢、生理活动的损伤及胚胎保存过程中液氮内可能聚集的病毒对胚胎安全性也存在一定的威胁。妊娠是评价胚胎发育潜能的最佳指标。通过研究2005-2012年867个冻融胚胎移植周期,3367枚胚胎情况,按冷冻保存时间分为4组:12~23个月、24~35个月、36~48个月>48个月,发现胚胎存活率、囊胚形成率、种植率、妊娠率、单胎婴儿出生体重各组间差异均无统计学意义,认为不同的胚胎储存时间不影响胚胎发育潜能.研究亦显示:胚胎冷冻保存时间不影响妊娠率、活产率及流产率,只有卵子年龄、胚胎存活率及移植胚胎数目影响妊娠率。本中心通过分析胚胎冷冻保存时间与临床妊娠结局的相关性,发现不同胚胎冷冻保存时间组的临床妊娠率比较差异无统计学意义,故认为胚胎冷冻时间的延长并不能降低胚胎发育及种植潜能,有再生育愿望的患者若有冷冻保存胚胎,应首先实施冷冻胚胎复苏后移植。
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不同的胚胎冻融方法对胚胎完整率也有影响,玻璃化冷冻胚胎复苏后胚胎卵裂球完整性更好,具有更高的发育潜能。有学者通过研究126个冻融胚胎移植周期发现:胚胎卵裂球无损伤组临床妊娠率为37.18%,种植率为23.72%,流产率为3.45%;部分卵裂球损伤组临床妊娠率为33.33%,种植率为13.85%,流产率为12、50%;两组相比,临床妊娠率差异无统计学意义,但种植率与流产率差异有统计学意义。认为部分卵裂球损伤能降低胚胎种植潜能,卵裂球完整性是影响临床妊娠率的关键。本研究中600个冻融胚胎移植周期,共复苏1680枚胚胎,其中5枚卵裂球从透明带中脱出而死亡,9枚卵裂球存在1~2个卵裂球死亡情况,胚胎完整率为99.16%。胚胎完整率高可能是导致冻融胚胎临床妊娠率不低于新鲜胚胎临床妊娠率的原因。
研究显示:在玻璃化冷冻中应用冷冻载杆(薄膜)与冷冻环相比,胚胎存活率均大于90%,差异无统计学意义,囊胚形成率分别为31、5%和16.1%,差异有统计学意义。认为冷冻载杆应用方便,胚胎不容易丢失,有更好的发育能力,值得广泛应用。本中心自2010年开展玻璃化冷冻以来,曾使用过冷冻环与冷冻载杆两种载体,也发现冷冻载杆既使用方便又能保证胚胎安全,因此目前全部应用载杆为胚胎载体。
首次冻融胚胎移植不孕的患者常担心自己再次移植时成功率会降低,往往心理压力较大。而本研究发现:第1次、第2次、第3次及≥第4次以上的冻融胚胎移植周期临床妊娠率分别为55.29%、56.39%、47.88%和47.05%,4组间比较差异无统计学意义。这说明多次实施冻融胚胎移植的患者每次移植均具有相同的怀孕几率,与随着移植周期数的增加,部分反复不孕患者增加了移植胚胎数目有关。
综上所述,胚胎冷冻保存时间的增加不影响胚胎发育潜能,胚胎玻璃化冷冻是保存女性生育力安全有效的方法。
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