细胞冻存是细胞生存的条件之一,细胞冻存都是采用的低温
液氮罐保温特性,目的就是我们的细胞离开生长环境依然可正常生存,使用我们的液氮生物容器储存细胞可以避免细胞污染现象,起到保护细胞的作用。
方法:
仪器采用
液氮罐、冻存管、离心管、吸管等
试剂:0.25%胰酶、造就基
冻存液的配置:添加甘油或者DSMO,浓度达到20%,配好冻存液以后在4摄氏度才可以生存。
一:将消化细胞悬液至离心管内。
二:1000rpm离心10分钟,弃上清液。
三:沉淀的情况下可以添加掩护液,然后将悬浮液分至冻存管内,每管控制在1ml左右,然后密封起来,一定要密封严,否则会造成爆炸现象。
四:最后贴上标签,表明细胞名称及日期。
五:温度流程:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。
最后提醒大家操纵液氮时应该避免出现冻伤现象,一定要观察液氮量,量少的话,随时注意增补液氮量,不然的话会影响标本的活性,一般30立方的液氮可以用1.5月,所以我们需要多留心些就好。