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液氮研磨如何操作
时间:2019-04-18 10:35来源: 作者:班德液氮罐 点击:
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液氮研磨如何操作？先了解一下液氮研磨原理吧！自增压液氮罐
液氮容器的准备
液氮一般保存于液氮罐中。实验前先准备一个保温桶，将适量液氮转移至保温桶中，同时还要准备一个不锈钢或塑料汤勺，汤勺的柄不够长时要想办法加长，以免冻伤手。
组织的处理及用量
任何组织在获得后如不立即使用，要尽快保存在低温环境中(一196℃液氮中速冻，一70℃保存)。使用时，植物组织应当先用自来水清洗外表的泥沙，用单蒸水冲洗两遍，用75%乙醇浸洗约30秒，再用灭菌双蒸水冲洗两遍，用无菌滤纸吸干，然后根据需要取适当部位的组织。动物组织不必清洗，但要尽量剔除周边的组织及血块。组织的取量要比实际需要量大1一2倍，因为研磨时部分组织会粘在研钵和研棒上，会致部分组织样本丢失。
研钵的固定
我们在实验时发现，研钵在加液氮后温度很低，外表会形成许多冰晶，用力研磨组织时易打滑，研钵内的组织液氮混合物很容易溅出，造成组织丢失，也容易冻伤手。如果在研钵下垫些纱布或滤纸，虽不易滑动，但由于缓冲作用，研磨时不受力，不足取。后来我们作了如下改进:一是做个木支架，即选一块厚约两寸的木板，在上面挖个半球形圆洞(大小根据研钵大小而定)，木板两端留一定长度以备手握之用，使用时将研钵卡在半球形洞中，既稳当又不会冻伤手;二是备一条干净的毛巾或纱布(干的)，折成长条形，将研钵包围起来，两端合并后用手抓住，这个方法简单实用，但要特别小心，以免冻伤。
研磨方法
空钵先用液氮预冷，再将研棒的上端用纱布包裹(用力时手不会痛)，组织最好切成薄片，研磨时不易溅出，也更容易磨碎，研棒最好顶着手心，这样便于用力。研磨过程中要避免液氮干涸，研磨至细粉即可。待液氮刚蒸发完时，用一个小药勺取出所需用量进行下一步实验，或者将组织粉末装人容器内，保存于一70℃的温度下，以备下一步实验用。使用得当的液氮研磨组织法，将为下一步实验成功奠定了基础。值得一提的是，操作中所有接触的器皿及耗材须清洗干净并消毒。如果研磨组织用于提取RNA时，使用的器皿及耗材必须采用焦碳酸二乙醋(DEPC)灭活RNase并进行高压消毒处理。
液氮容器的准备
液氮一般保存于液氮罐中。实验前先准备一个保温桶，将适量液氮转移至保温桶中，同时还要准备一个不锈钢或塑料汤勺，汤勺的柄不够长时要想办法加长，以免冻伤手。
组织的处理及用量
任何组织在获得后如不立即使用，要尽快保存在低温环境中(一196℃液氮中速冻，一70℃保存)。使用时，植物组织应当先用自来水清洗外表的泥沙，用单蒸水冲洗两遍，用75%乙醇浸洗约30秒，再用灭菌双蒸水冲洗两遍，用无菌滤纸吸干，然后根据需要取适当部位的组织。动物组织不必清洗，但要尽量剔除周边的组织及血块。组织的取量要比实际需要量大1一2倍，因为研磨时部分组织会粘在研钵和研棒上，会致部分组织样本丢失。
研钵的固定
我们在实验时发现，研钵在加液氮后温度很低，外表会形成许多冰晶，用力研磨组织时易打滑，研钵内的组织液氮混合物很容易溅出，造成组织丢失，也容易冻伤手。如果在研钵下垫些纱布或滤纸，虽不易滑动，但由于缓冲作用，研磨时不受力，不足取。后来我们作了如下改进:一是做个木支架，即选一块厚约两寸的木板，在上面挖个半球形圆洞(大小根据研钵大小而定)，木板两端留一定长度以备手握之用，使用时将研钵卡在半球形洞中，既稳当又不会冻伤手;二是备一条干净的毛巾或纱布(干的)，折成长条形，将研钵包围起来，两端合并后用手抓住，这个方法简单实用，但要特别小心，以免冻伤。
研磨方法
空钵先用液氮预冷，再将研棒的上端用纱布包裹(用力时手不会痛)，组织最好切成薄片，研磨时不易溅出，也更容易磨碎，研棒最好顶着手心，这样便于用力。研磨过程中要避免液氮干涸，研磨至细粉即可。待液氮刚蒸发完时，用一个小药勺取出所需用量进行下一步实验，或者将组织粉末装人容器内，保存于一70℃的温度下，以备下一步实验用。使用得当的液氮研磨组织法，将为下一步实验成功奠定了基础。值得一提的是，操作中所有接触的器皿及耗材须清洗干净并消毒。如果研磨组织用于提取RNA时，使用的器皿及耗材必须采用焦碳酸二乙醋(DEPC)灭活RNase并进行高压消毒处理。
